Diagnóstico de herpes

Diagnóstico de herpes é baseado no comportamento da libertação viral clássico em culturas de células sensíveis, imunofluorescência e métodos serológicos, a realização de estudos colposcópicas utilizando métodos de biologia molecular moderna (PCR, dot-hibridação), que permite diagnosticar todo o grupo de vírus do herpes, incluindo o HHV-6 e HHV-7 tipos.

Métodos de diagnóstico laboratorial de infecção herpética

Os principais métodos destinados a secretar HSV ou a detectar partículas virais e / ou seus componentes	Métodos auxiliares destinados a detectar anticorpos contra HSV em fluidos biológicos do corpo humano
Isolamento de HSV em culturas sensíveis de células e animais Microscopia eletrônica direta e imune Opções MFA diretas e indiretas IFA Métodos biológicos moleculares Reação de aglutinação de látex	Reação de neutralização RSK Determinação de anticorpos contra proteínas não estruturais de HSV-1,2

Mostra-se que 76% dos pacientes apresentam herpes genital (GH) causada pelo HSV-2 e 24% - tipo HSV-1. E GG como uma monoinfecção ocorreu apenas em 22% dos pacientes, em 78% dos casos, as associações microbianas foram detectadas. Em 46% dos pacientes, detectou-se parasitocenose causada por dois agentes patogênicos, incluindo a clamídia em 40% dos casos. Menos frequentemente nos esfregaços determinados gardnerelly, Trichomonas, gonococos.

Em 27% dos pacientes, a parasitocenose foi representada por três e 5,2% por quatro patógenos. E, mais frequentemente, houve uma combinação de clamídia com os fungos de Gardnerella e Candida. Esses dados justificam a necessidade de um exame bacteriológico completo de pacientes com GH com o objetivo de identificar combinações de agentes patogênicos, bem como um estudo aprofundado da patogênese de infecções mistas do trato urogenital, o que permitirá uma terapia complexa diferencial de infecção herpética.

Materiais a serem estudados no isolamento do VHS dependendo da localização das lesões herpéticas

Localização de lesões	Conteúdo de vesículas	Raspagem de células				SDC	Aspirar dos brônquios	Bioptat	Sangue
		1	2	3	4
Couro	+								+
Olhos			+						+
Genitália				+					+
Anus	+				+				+
Boca	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Leve		+					+		+
O fígado								+	+
Herpes congênita	+	+	+				+		+

Métodos de diagnóstico laboratorial de infecção por citomegalovírus

Métodos	Tempo necessário para obter resultados	Notas
VIRUSOLÓGICO
Microscopia eletrônica	3 horas	Bater
Isolamento do vírus na cultura celular (CPD)	4-20 dias	Padrão, lento
Coloração imunofluorescente de AH precoce com anticorpos monoclonais	6 horas	Menos específico
TITOLÓGICO	2-3 horas	Menos específico
SEOLÓGICO
RSK	2 dias	Standart
Ssubsistence	1 dia	Laborioso
REEF	6 horas	Simples, específico
NFIF	6 horas	Complicado
RIMF	6 horas	Complicado
IFA (IgM, TO)	6 horas	Rápido, simples
Immunoblot	6 horas	Caro
MOLECULAR-BIOLÓGICO
MG	5-7 dias	Costoso, demorado
PCR	3 horas	Caro

Métodos para diagnosticar o vírus do herpes zoster

Métodos de diagnóstico	Técnicas de laboratório
INDIRETOS
Alocação	Cultura de tecidos, embriões de frango, animais de laboratório, co-cultivo com células permissivas ou vírus auxiliares
Identificação de isolados	Reação de neutralização, DSC, IF, IPPE, reação de isolados de precipitado, aglutinação, IF
Direto
Citologia	Manchas: imunofluorescência de cor
Histologia	Patologia da célula
Estrutura	Microscopia embrionária, microscopia imunoelectrónica
Determinação de antígenos	IF, PIÉF, RIM, IFA
Determinação da produção local de anticorpos	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Abordagens Biológicas Moleculares	Hibridação molecular, PCR

Diagnóstico laboratorial de infecção causada pelo vírus do herpes zoster

Problemas de diagnóstico	Métodos	Resultados Esperados
Infecção primária aguda	1	Detecção após 2 horas
	2	O nível de anticorpos cresce lentamente
	3	Presente 3 dias após a infecção
Infecção aguda reativada	1	Detecção de ULV em 2 horas
	2	O nível de anticorpos cresce lentamente
	4	Presente 4 dias após a aparição de erupção cutânea

1. a determinação no fluido das vesículas do WIEF;
2. serologia: DSC, ELISA, com o objetivo de identificar
3. Serologia: ELISA, destinado a detectar IgM;
4. serologia: ELISA, com o objetivo de detectar IgA, IgM.

Métodos para indicar a resposta imune de uma infecção devido ao vírus do herpes zoster

Abordagem	Método
Detecção de aumento do título de anticorpos no segundo soro	RSK, RTGA, RPGA, reação de neutralização IF, RIM, ELISA
Detecção de anticorpos específicos de classe Ig G, Ig A na primeira amostra de soro	IFA, IF, RIM, latex-aglutinação

Interpretação dos resultados do exame sorológico dos soros do paciente sobre infecções por herpesvírus (ELISA)

Nome da infecção / marcador	Limites médios para infecções
	Resultados da análise	Interpretação
Citomegalia Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) IgM anti-CMV (100-300%)	Positivo 1-6 Positivo 6-10 Positivo> 10 Negativo Positivo 100-300 Negativo <90 Duvidoso 90-100	Remissão Agravação da doença Fase aguda da doença Sem infecção (doença) Fase aguda da doença Repita a análise após 2-3 semanas
Herpes simples 1,2 serotipos Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positivo 100-400 Positivo 400-800 Positivo> 800 Negativo <100	Remissão Agravação da doença Fase aguda da doença Sem infecção (doença)

A tabela apresenta os principais métodos de diagnóstico laboratorial de infecções por herpesvírus e também recomenda materiais biológicos que são examinados para o isolamento do HSV, levando em conta a localização de lesões herpéticas

Confiável é a alocação de herpes simple e CMV através da infecção de culturas de células sensíveis. Assim, no exame virológico de 26 pacientes no período de recaída, o HSV foi isolado em uma cultura de células Vero sensível em 23 casos (88,4%). Nas culturas infectadas, observou-se um padrão de ação citopática característico do HSV - a formação de células gigantes multinucleadas ou a acumulação de células arredondadas e ampliadas na forma de cachos. Em 52,1% dos casos, foi possível detectar focos do efeito citopático do vírus às 16-24 horas após a infecção. Por 48-72 horas de incubação de culturas infectadas, a porcentagem de materiais que causaram destruição celular específica aumentou para 87%. E apenas em 13% dos casos, os resultados positivos foram detectados 96 horas após a infecção e mais ou com passagens repetidas.

Métodos de diagnóstico laboratorial de infecção herpética generalizada

Os principais métodos visando a detecção (isolamento) de herpesvírus, suas partículas e seus componentes	Métodos auxiliares destinados a detectar anticorpos contra vírus herpes em fluidos biológicos, detectando mudanças enzimáticas no soro sanguíneo
Isolamento de vírus herpes em culturas de células sensíveis e animais microscopia electrónica directa e imunológico método de imunoperoxidase indirecta e directa formas de realização directos e Opções técnica de imunofluorescência indirecta opções ELISA Concretizações do molecular (ADN-ADN) que hibridam Polymerase Chain Reaction aglutinação em látex Reacção	A neutralização do complemento da reacção de fixação reacção látex aglutinação indirecta fluorescente método anticorpo concretização Indirecto variante método de imunoperoxidase Concretizações ELISA Método imunológico blotting fixação radial do complemento Método Determinação de níveis de alanina e aspartato

Os métodos sorológicos são utilizados para diagnosticar a mononucleose infecciosa (infecção causada por VEB). A reação de Paul Bunnel com eritrócitos de um carneiro, um título diagnóstico de 1:28 e superior com um único estudo de soro, ou um aumento de 4 vezes nos anticorpos no exame de soros pareados. Use a reação Goff-Bauer com uma suspensão de glóbulos vermelhos formalizados a 4% do cavalo. O resultado é levado em consideração após 2 minutos, com mononucleose infecciosa, a reação é altamente específica.

Atualmente, um imunoensaio enzimático (ELISA) está sendo desenvolvido para diagnosticar a mononucleose infecciosa. Neste caso, os anticorpos IgG e IgM no soro do paciente são determinados pela incubação com linfoblastos infectados com EBV, seguido de tratamento com anticorpos fluorescentes. No período agudo da doença, os anticorpos para o antígeno da cápside viral são determinados em um título de 1: 160 e acima.

Ao utilizar um número de sistemas de teste comerciais importados no IFA podem identificar: anticorpos para anticorpos ant envelope Egan EBV de antigénio precoce do EBV, o anticorpo geral a um antigénio precoce do EBV, determinado na fase aguda da doença e no núcleo e no citoplasma, e o anticorpo limitado EBV cedo, determinado na fase aguda da doença e no núcleo e no citoplasma de células, delimitada anticorpos para EBV início de antigénio, determinada no meio da doença apenas no citoplasma de células, e os anticorpos para antigénio nuclear de EBV. O uso desses sistemas de teste permite o diagnóstico diferencial de uma série de doenças associadas ao EBV.

Depois de ELISA positivo para identificar os anticorpos de EBV dão resposta confirmando imunotransferência, que detectam a presença de anticorpos para separar as proteínas de EBV de marcador (P-proteínas): P23, P54, P72 (a presença da proteína sugere a possibilidade de reprodução do EBV), p 138. Dito Os métodos de laboratório acima são usados para controlar a eficácia do tratamento.

A sensibilidade dos métodos virológicos é de 85-100%, a especificidade é de 100%, o tempo de estudo é de 2-5 dias. Muitas vezes, na prática, o método de imunofluorescência direta (PIF) com anticorpos policlonais ou monoclonais contra HSV-1 e HSV-2 é usado. O método UIF pode ser facilmente reproduzido em um laboratório clínico convencional, não é caro, a sensibilidade é superior a 80%, a especificidade é de 90-95%. A microscopia de imunofluorescência revelou a presença de inclusões citoplasmáticas, características morfológicas, porcentagem de células infectadas em esfregaços - raspagens da uretra, canal cervical, colo do útero, reto.

O método UIF dá uma idéia das propriedades morfológicas das células e mudanças na localização dos antígenos HSV. Além dos sinais diretos de danos celulares causados por vírus herpes (detecção de luminescência específica), há sinais indiretos de infecção herpética de acordo com os dados UIF:

• agregação de matéria nuclear, esfoliação de karyoolma;
• presença do chamado "buracos" de núcleos, quando apenas um carylemma permanece do núcleo da célula;
• a presença de inclusões intranucleares - o bezerro Caudry.

Ao configurar a UIF, o médico recebe não apenas uma avaliação qualitativa, mas também quantitativa do estado das células infectadas, que utilizamos para avaliar a eficácia da terapia antiviral com aciclovir (AC). Assim, 80 pacientes com herpes genital simples (GG) foram examinados pelo método UIF em dinâmica. Foi demonstrado que, antes do tratamento com aciclovir em esfregaços, 88% dos pacientes apresentavam alta porcentagem de células infectadas (50-75% e acima), depois de um curso de aciclovir em esfregaços 44% dos pacientes apresentaram células saudáveis, 31% 25% dos pacientes tinham até 10% das células infectadas.

O conteúdo de células infectadas em esfregaços (reação PIF) de pacientes com herpes genital, tratados com aciclovir

Períodos de doença	Porcentagem em esfregaços
	Células infectadas					células normais
	Mais de 75%	50-75%	40-50%	10%	Células solteiras em n / sp
Recaída (antes do tratamento)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remissão (após o tratamento)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Usando muitos anos de UIF e o método de hibridação ponto-ponto, quase 100% dos casos coincidiram com os resultados do estudo. Note-se que, a fim de aumentar a confiabilidade do diagnóstico de GH, especialmente nos casos em que há subclínica e formas malomanifestnyh de herpes, recomenda-se usar o método de diagnóstico laboratorial 2-3, especialmente ao examinar mulheres grávidas, mulheres com história obstétrica desfavorecidos, as pessoas com diagnóstico ginecológico não especificado.

Assim, quando o diagnóstico por PCR das infecções virais-bacterianas do trato urogenital, é necessário avaliar os resultados positivos obtidos levando em consideração a anamnese, a presença (ou a ausência) de sintomas clínicos específicos da doença. Se a clamídia é detectada com PCR, então, neste caso, é possível falar sobre infecção e resolver os problemas de terapia em conformidade. No caso da detecção de micoplasmas (ureaplasmas), que são microorganismos oportunistas, são necessários estudos de cultura adicionais para confirmar o diagnóstico, isto é, a semeadura do material do paciente para culturas de células sensíveis. Somente quando resultados positivos são obtidos na análise de cultura, podemos falar sobre confirmação laboratorial do diagnóstico de micoplasmose. O mesmo método permitirá, se necessário, determinar a sensibilidade dos micoplasmas isolados às formas medicinais usadas com freqüência (antibióticos, fluoroquinolonas, etc.).

Talvez uma infecção em um estágio com vários vírus da família Nepresviridae. Muitas vezes, detectamos infecção de um paciente com vírus HSV-1, HSV-2 e CMV. Muito mais frequentemente infectados com vários vírus herpes foram pacientes com manifestações clínicas e laboratoriais de IDS secundário (pacientes com oncohematologia, oncológica, infectados pelo HIV). Assim, é demonstrado que transtornos clínicos e imunológicos que progridem com a infecção pelo HIV são acompanhados por um aumento no número de vírus herpesvírus detectados por hibridização molecular. Neste prognóstico, o mais significante pode ser considerado uma detecção complexa de um estágio de DNA de HSV-1, CMV e HHV-6.

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