Imunofenotipagem das hemoblastoses

O progresso significativo na pesquisa hematológica nos últimos anos está associado ao uso de métodos imunológicos modernos e meios automatizados de análise e triagem de células do sangue periférico e da medula óssea - citômetros de fluxo. Estudos morfológicos e citoquímicos tradicionais de células substrato de doenças (sangue, medula óssea vermelha, linfonodos, baço, etc.) em muitos casos, especialmente em doenças linfoproliferativas, não nos permitem identificar toda a variedade de variantes entre formas morfologicamente semelhantes e estabelecer a fonte de origem do clone patológico. Esses problemas podem ser resolvidos apenas pelo estudo das características imunológicas das células. Cada estágio de diferenciação das células hematopoiéticas corresponde ao seu próprio conjunto de antígenos, que de acordo com a classificação internacional são chamados de diferenciação e são divididos em grupos de diferenciação, designados CD.

Nas alterações neoplásicas, um bloqueio de diferenciação pode ocorrer em qualquer estágio do desenvolvimento celular normal, resultando na formação de um clone de células patológicas que determinam o substrato da doença e apresentam as mesmas características imunológicas (ou fenotípicas). Ao realizar estudos desses marcadores nas células, é possível determinar a qual forma e variante da doença eles correspondem, ou seja, com base no fenótipo imunológico das células, realizar o diagnóstico diferencial, o que é mais difícil em doenças linfoproliferativas, pois as células principais do substrato patológico da doença são células morfologicamente quase idênticas.

A fenotipagem permite o uso de anticorpos monoclonais para tipificar células sanguíneas blásticas e maduras das séries mieloide, mono e linfocítica, pela presença de antígenos de diferenciação (receptores) na parede celular. A seção "Avaliação do estado imunológico do organismo" descreve parcialmente as características e o valor diagnóstico do estudo de marcadores celulares; abaixo, uma breve descrição dos marcadores antigênicos das células em relação ao diagnóstico de hemoblastoses. Os seguintes antígenos (marcadores) podem ser detectados nas membranas das células sanguíneas e da medula óssea vermelha.

• O CD2 é uma glicoproteína transmembrana monomérica. Está presente na superfície de todos os linfócitos T circulantes no sangue e em alguns linfócitos NK. O CD2 está envolvido no processo de ativação alternativa dos linfócitos T. A detecção do CD2 por meio de anticorpos monoclonais é utilizada na prática clínica para fenotipagem de leucemia aguda de células T, linfomas, condições inflamatórias crônicas e imunodeficiências.
• O CD3 é um complexo proteico associado ao receptor antígeno-específico das células T, sendo o principal marcador funcional dos linfócitos T. Ele facilita a transferência do sinal de ativação da membrana para o citoplasma da célula. A dosagem de CD3 é indicada para o diagnóstico de leucemia aguda de células T, linfomas (o CD3 não é expresso em neoplasias linfoides não T) e imunodeficiências.
• CD4 é uma glicoproteína transmembrana expressa por uma subpopulação de células T auxiliares (indutores), que constituem 45% dos linfócitos do sangue periférico. Nos estágios iniciais do desenvolvimento dos linfócitos no timo, os antígenos CD4, assim como o CD8, são expressos por todos os linfócitos corticais. Os timócitos medulares, cujo fenótipo é semelhante ao das células T CD4+ maduras do sangue periférico (células T auxiliares), já expressam receptores CD4 ou CD8. No sangue periférico, até 5% das células carregam marcadores CD4 e CD8. Uma expressão menor de CD4 é possível em algumas células da série monocítica. O CD4 é expresso na maioria dos casos de linfomas de células T, incluindo micose fungoide, bem como na leucemia de células T associada ao HTLV (HTLV - vírus linfotrópico de células T humanas).
• O CD5 é uma glicoproteína de cadeia única presente em todos os linfócitos T maduros e na maioria dos timócitos, sendo fracamente expresso pelos linfócitos B. O CD5 é detectado em células neoplásicas de leucemia linfocítica crônica de células B e linfoma centrocítico. Em outros tipos de doenças linfoides malignas – linfoma folicular, leucemia de células pilosas e linfoma de grandes células – o CD5 não é expresso.
• O CD7 é uma proteína de cadeia única, o marcador mais precoce da diferenciação das células T. É expresso pelos pró-linfócitos T antes mesmo de sua migração para o timo. O CD7 é detectado na maioria das células NK, com fraca expressão observada nos monócitos. Linfócitos B e granulócitos não contêm esse antígeno. A determinação do CD7 é usada para diagnosticar linfomas e leucemia linfoblástica de células T na infância.
• O CD8 é uma proteína composta por duas cadeias polipeptídicas ligadas por pontes dissulfeto. É expresso por uma subpopulação de linfócitos T citotóxicos e supressores, que constituem de 20% a 35% dos linfócitos do sangue periférico. Este antígeno também é expresso por linfócitos NK, timócitos corticais, 30% dos timócitos medulares e uma subpopulação de células vermelhas da medula óssea. O CD8 é estudado para quantificar o conteúdo de células T supressoras (consulte a seção "Linfócitos T supressores no sangue" acima).

• CD10 é uma endopeptidase associada à membrana celular. O CD10 é expresso por formas jovens de linfócitos B e por uma subpopulação de linfócitos corticais. O CD10 é expresso por todas as células da LLA.
• O CD11c é expresso na membrana celular por macrófagos, monócitos, granulócitos, células NK e células de leucemia de células pilosas.
• CD13 é uma glicoproteína expressa por células da linhagem mielomonocítica (células progenitoras, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, monócitos e células de leucemia mieloide). Está ausente em linfócitos T e B, eritrócitos e plaquetas.
• CD14 é uma glicoproteína de membrana de superfície. É expressa principalmente por monócitos e macrófagos. O CD14 é detectado em mais de 95% dos monócitos no sangue periférico e na medula óssea. Uma forte expressão de CD14 é observada na leucemia mieloblástica aguda. Este antígeno não é expresso na leucemia linfoblástica aguda e crônica.
• O CD15 é um oligossacarídeo. Participa da fagocitose e da quimiotaxia. Este antígeno está presente na superfície de granulócitos maduros e células de Berezovsky-Sternberg. A expressão do antígeno CD15 é detectada na doença de Hodgkin. Nos linfomas não Hodgkin, o CD15 não é detectado na maioria dos casos.
• O CD16 é expresso na superfície de granulócitos, monócitos, macrófagos e células NK. Todos os linfócitos que expressam esse antígeno têm capacidade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos. O CD16 é determinado durante a tipagem de leucemias mielocíticas crônicas, para caracterizar as células NK.
• CD19 é uma glicoproteína presente em todos os linfócitos B periféricos e em todos os precursores de células B. Está ausente nos plasmócitos. É o marcador mais precoce de células B e desempenha um papel importante na regulação da ativação e proliferação de células B. O CD19 é expresso em todas as células neoplásicas de leucemia aguda de origem B e também está presente em algumas formas de leucemia monoblástica aguda.
• O CD20 é uma proteína não glicosilada. Na ontogênese dos linfócitos B, o antígeno CD20 aparece após o CD19, na fase de pré-diferenciação dos linfócitos B. Está ausente da membrana plasmática dos plasmócitos. É expresso na LLA, leucemia linfocítica crônica de células B, leucemia de células pilosas, linfoma de Burkitt e, muito raramente, na leucemia monoblástica aguda.
• CD21 é uma glicoproteína presente em quantidades significativas nos linfócitos B dos órgãos linfoides e em pequenas quantidades nas células B do sangue periférico. CD21 é um receptor para o vírus Epstein-Barr.
• CD22 é uma proteína composta por duas cadeias polipeptídicas. É expressa na membrana da maioria dos linfócitos B, incluindo células precursoras (prolinfócitos). O antígeno não é expresso nos linfócitos B (plasmócitos) após sua ativação. A expressão mais pronunciada de CD22 é detectada em células na leucemia de células pilosas, fraca na leucemia mieloide e na leucemia linfoblástica aguda (LLA) de células não T.
• CD23 é uma glicoproteína expressa em uma extensão muito maior por linfócitos B ativados do sangue periférico. O CD23 medeia a citotoxicidade dependente de IgE e a fagocitose por macrófagos e eosinófilos.
• CD25 é uma glicoproteína de cadeia única identificada como um receptor de baixa afinidade para IL-2. Este receptor é expresso em linfócitos T ativados e, em menor densidade, em células B ativadas. No sangue periférico de indivíduos saudáveis, o antígeno está presente em mais de 5% das células linfoides.
• O CD29 é um receptor de fibronectina. É amplamente distribuído nos tecidos e expresso por leucócitos. A detecção de CD29 em células sanguíneas periféricas é usada para tipificar uma subpopulação de células T com o fenótipo CD4+CD29+, chamadas células auxiliares tipo 2 (Th2). Essas células participam da resposta imune humoral produzindo linfocinas.
• CD33 é uma glicoproteína transmembrana. Está presente na superfície de células das séries mieloide e monocítica. É encontrada na superfície de monócitos e, em menor extensão, de granulócitos no sangue periférico. Aproximadamente 30% das células da medula óssea vermelha expressam CD33, incluindo mieloblastos, promielócitos e mielócitos. O antígeno está ausente nas membranas de células-tronco pluripotentes. A determinação de CD33 é usada para caracterizar células em leucemias de origem mieloide. Células leucêmicas de origem linfoide e eritroide não expressam CD33.
• O CD34 é uma fosfoglicoproteína expressa por células progenitoras hematopoiéticas, incluindo células-tronco monopotentes. A expressão mais pronunciada do antígeno é observada em células progenitoras precoces; à medida que as células amadurecem, a expressão do marcador diminui. O CD34 também é encontrado em células endoteliais. A determinação do CD34 é usada para caracterizar células em leucemias mieloblásticas e linfoblásticas agudas. Em leucemias linfocíticas crônicas e linfomas, a expressão do antígeno CD34 não é detectada.

• O CD41a é expresso por plaquetas e megacariócitos. Anticorpos monoclonais para detectar CD41a são usados para diagnosticar leucemia megacarioblástica. Na trombastenia de Glanzmann, a expressão desse antígeno está ausente ou significativamente suprimida.
• CD42b é uma glicoproteína de membrana composta por duas cadeias polipeptídicas. O marcador é detectado na superfície de plaquetas e megacariócitos. Na prática clínica, a detecção de CD42b é utilizada para diagnosticar trombocitopatia - síndrome de Bernard-Soulier.
• O CD45RA pertence à classe das glicoproteínas transmembrana. É um antígeno leucocitário comum. É expresso na membrana celular dos linfócitos B, em menor extensão nos linfócitos T e nos timócitos medulares maduros. O marcador não é expresso pelos granulócitos.
• CD45RO é uma isoforma de baixo peso molecular do CD45RA, um antígeno leucocitário comum. É detectado em células T (linfócitos T de memória), uma subpopulação de linfócitos B, monócitos e macrófagos. Os anticorpos monoclonais para CD45RO interagem com a maioria dos timócitos, uma subpopulação de linfócitos T CD4+ e CD8+ em repouso e células T maduras ativadas. Células de origem mielomonocítica, granulócitos e monócitos também carregam esse antígeno. É detectado em linfomas centroblásticos e imunoblásticos.
• O CD46 é um dímero O-glicosilado. É amplamente distribuído nos tecidos e expresso por linfócitos T e B, monócitos, granulócitos, células NK, plaquetas, células endoteliais e fibroblastos, mas está ausente na superfície dos glóbulos vermelhos. O CD46 fornece proteção tecidual contra o complemento.
• O CD61 é um antígeno plaquetário. É expresso em plaquetas do sangue periférico e da medula óssea vermelha, bem como em megacariócitos e megacarioblastos. Sua dosagem é utilizada como marcador na leucemia megacarioblástica aguda. A expressão do antígeno está ausente ou suprimida em pacientes com trombastenia de Glanzmann.
• O CD95, também chamado de Fas ou APO-1, é uma glicoproteína transmembrana, membro da família de receptores do fator de necrose tumoral. É expresso em quantidades significativas nos linfócitos T (CD4+ e CD8+) do sangue periférico e, em menor extensão, nos linfócitos B e nas células NK. Este antígeno também é expresso em granulócitos, monócitos, células teciduais e células neoplásicas. A ligação do CD95 ao ligante Fas (CD95L) induz apoptose nas células.
• CD95L, ou ligante Fas, é uma proteína de membrana pertencente à família de receptores do fator de necrose tumoral. Este antígeno é expresso por linfócitos T citotóxicos, células NK e, muito frequentemente, células tumorais; é o principal indutor de apoptose nas células.
• O HLA-DR é um determinante monomórfico de moléculas de classe II do complexo principal de histocompatibilidade (HLA) humano. O marcador é expresso em células de Langerhans, células dendríticas de órgãos linfoides, certos tipos de macrófagos, linfócitos B, células T ativadas e células epiteliais tímicas. O estudo deste marcador é utilizado para a determinação quantitativa de linfócitos T ativados com o fenótipo CD3+ HLA-DR+.

Usando uma seleção diferente de anticorpos monoclonais para marcadores, é possível criar um retrato fenotípico de células características de uma determinada forma de leucemia.

Além do uso de métodos de imunofenotipagem para diagnóstico e diagnóstico diferencial de hemoblastoses, sua utilização no processo terapêutico para avaliar o estado de remissão e a população residual de células leucêmicas tem se mostrado especialmente importante. Conhecendo o "retrato" fenotípico das células blásticas durante o período de diagnóstico, esses marcadores permitem detectar células do clone leucêmico durante o período de remissão e, pelo aumento em seu número, prever o desenvolvimento de uma recidiva muito antes (1 a 4 meses) do aparecimento de seus sinais clínicos e morfológicos.

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