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Reação em cadeia da polimerase (PCR) no diagnóstico de doenças infecciosas
Médico especialista do artigo
Última revisão: 05.07.2025
A PCR é um dos métodos de diagnóstico de DNA que permite aumentar o número de cópias da seção detectada do genoma (DNA) de bactérias ou vírus em milhões de vezes usando a enzima DNA polimerase. A seção testada de ácido nucleico específica para um determinado genoma é multiplicada (amplificada) muitas vezes, o que permite sua identificação. Primeiro, a molécula de DNA de bactérias ou vírus é dividida em duas cadeias por aquecimento, então na presença de primers de DNA sintetizados (a sequência de nucleotídeos é específica para o genoma que está sendo determinado), eles se ligam a seções complementares de DNA, e a segunda cadeia de ácido nucleico é sintetizada após cada primer na presença de DNA polimerase termoestável. Duas moléculas de DNA são obtidas. O processo é repetido muitas vezes. Uma molécula de DNA, ou seja, uma partícula de bactéria ou vírus, é suficiente para o diagnóstico. A introdução de uma etapa adicional na reação - a síntese de DNA em uma molécula de RNA usando a enzima transcriptase reversa - tornou possível testar vírus de RNA, como o vírus HCV. A PCR é um processo de três etapas que se repete ciclicamente: desnaturação, anelamento de primers e síntese de DNA (polimerização). A quantidade de DNA sintetizada é identificada por ELISA ou eletroforese.
A PCR pode usar vários materiais biológicos — soro ou plasma sanguíneo, raspagem uretral, biópsia, líquido pleural, líquido cefalorraquidiano, etc. A PCR é usada principalmente para diagnosticar doenças infecciosas, como hepatite viral B, hepatite viral C, hepatite viral D, infecção por CMV, infecções sexualmente transmissíveis (gonorreia, clamídia, micoplasma, infecções por ureaplasma), tuberculose, infecção por HIV, etc.
A vantagem da PCR no diagnóstico de doenças infecciosas em relação a outros métodos de pesquisa é a seguinte:
- o agente infeccioso pode ser detectado em qualquer ambiente biológico do corpo, incluindo material obtido durante uma biópsia;
- é possível diagnosticar doenças infecciosas nos estágios iniciais da doença;
- é possível avaliar quantitativamente os resultados da pesquisa (quantos vírus ou bactérias estão contidos no material em estudo);
- alta sensibilidade do método; por exemplo, a sensibilidade da PCR para a detecção do DNA do vírus da hepatite B no sangue é de 0,001 pg/ml (aproximadamente 4×10 2 cópias/ml), enquanto a sensibilidade do método de hibridização de DNA usando sondas ramificadas é de 2,1 pg/ml (aproximadamente 7×10 5 cópias/ml).
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