Brucellae

A brucelose é uma doença infecciosa única que afeta humanos e animais, causada por bactérias do gênero Brucella. Na Rússia, cerca de 500 casos primários de brucelose em humanos são registrados anualmente.

A brucelose é transmitida principalmente por animais domésticos (ovelhas, cabras, vacas, porcos e renas – o principal reservatório do patógeno na natureza). A brucelose existe há muito tempo e tem sido descrita sob nomes determinados por sua distribuição geográfica (febre de Malta, napolitana, de Gibraltar, febre do Mediterrâneo).

O patógeno foi descoberto em 1886 por D. Bruce, que o encontrou em uma preparação do baço de um soldado que morreu de febre de Malta, e o chamou de micrococo maltês - Micrococcus melitensis. Foi estabelecido que seus principais portadores são cabras e ovelhas, e a infecção ocorre ao consumir leite cru delas. Em 1897, B. Bang e B. Stribolt descobriram o patógeno do aborto infeccioso em vacas - Bacterium abortus bovis, e em 1914, J. Traum descobriu o patógeno do aborto infeccioso em porcos - Brucella abortus suis. Um estudo comparativo das propriedades de Brucella melitensis e Brucella abortus bovis conduzido entre 1916 e 1918 por A. Ivens mostrou que elas são quase indistinguíveis uma da outra em muitas propriedades. Nesse sentido, foi proposto combiná-las em um grupo, nomeado em homenagem a Bruce - Brucella. Em 1929, I. Heddleson incluiu Brucella abortus suis neste grupo e propôs dividir o gênero Brucella em 3 espécies: Brucella melitensis (Micrococcus melitensis), Brucella abortus (Brucella abortus bovis) e Brucella suis (Brucella abortus suis).

A doença causada por brucellae em humanos e animais foi denominada brucelose. Posteriormente, o gênero Brucella foi complementado com mais três espécies: Brucella ovis foi isolada de carneiros com epididimite (1953), Brucella neotomae de ratos-do-mato (1957) e Brucella canis de cães de caça (1966). De acordo com a classificação de Bergey (2001), as brucellae pertencem à classe Alphaproteobacteria.

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Morfologia da Brucella

Brucella apresenta propriedades morfológicas, tintoriais e culturais semelhantes. São pequenas células cocoides gram-negativas com diâmetro de 0,5 a 0,7 μm e comprimento de 0,6 a 1,5 μm, dispostas aleatoriamente, às vezes em pares, não possuem flagelos e não formam esporos ou cápsulas. O conteúdo de G + C no DNA é de 56 a 58 mol%.

Propriedades bioquímicas da Brucella

Brucella são aeróbios ou microaerófilos, não crescem em condições anaeróbicas. A temperatura ótima para o crescimento é de 36-37 °C; pH 7,0-7,2; cresce bem em meios nutrientes convencionais, mas melhor com a adição de soro ou sangue. Meios recomendados: ágar nutriente com adição de soro (5%) e glicose; ágar preparado em infusão de batata, com adição de 5% de soro; ágar sangue; caldo carne-peptona. Uma característica da Brucella abortus é a necessidade de um maior teor de CO2 (5-10%) na atmosfera de crescimento. O crescimento lento é muito característico das brucelas, especialmente nas primeiras gerações: quando semeadas de humanos e animais, o crescimento às vezes aparece após 2-4 semanas. As colônias de Brucella são incolores, convexas, redondas - em forma de S, ou ásperas - em forma de R, delicadas e transparentes no início, tornando-se turvas com a idade.

Colônias de Brucella canis, Brucella ovis e Brucella suis, do 5º biótipo, sempre apresentam a forma R. O crescimento de Brucella em meio de cultura é acompanhado por turbidez uniforme. Tiamina, biotina e niacina são necessárias para o crescimento de Brucella. Brucella fermenta glicose e arabinose com formação de ácido sem gás, não forma indol e reduz nitratos a nitritos. A formação de sulfeto de hidrogênio é mais pronunciada em Brucella suis.

No total, 10-14 frações de antígeno foram detectadas em Brucella usando imunoeletroforese de extratos preparados a partir de células destruídas por ultrassom. Brucella tem um antígeno gênero específico comum, vários outros antígenos somáticos, incluindo M espécie-específico (predominante em Brucella melitensis), A (predominante em Brucella abortus) e R (em formas brutas). Os antígenos M e A também são detectados em outras espécies (biovares) de Brucella, mas em proporções diferentes, o que deve ser levado em consideração ao identificá-los. Antígenos comuns a Francisella tularensis, Bordetella bronchiseptica e Y. enterocolitica (sorotipo 09) foram detectados. Devido ao fato de que algumas características de brucellae variam, a espécie Brucella melitensis é dividida em 3 biovares, a espécie Brucella abortus - em 9 e B. suis - em 5 biovares. Para sua diferenciação em espécies e biótipos e identificação, um complexo de características é usado, que inclui, além de propriedades morfológicas e tintoriais, também a necessidade de CO2 para crescimento, a capacidade de crescer em meios na presença de certos corantes (fucsina básica, tionina, safranina), secretar H2S, formar urease, fosfatase, catalase (a atividade dessas enzimas é mais fortemente expressa em Brucella suis, elas não crescem em um meio com safranina), sensibilidade ao bacteriófago de Tbilisi, aglutinação com soros monoespecíficos. Se necessário, testes metabólicos adicionais são usados: a capacidade de oxidar certos aminoácidos (alanina, asparagina, ácido glutâmico, ornitina, citrulina, arginina, lisina) e carboidratos (arabinose, galactose, ribose, D-glicose, D-eritritol, D-xilose).

A quarta biovar é a Brucella suis, já que seu principal portador não são os porcos, mas as renas, e levando em consideração suas outras características, é aconselhável distingui-la como uma espécie independente, Brucella rangiferis.

A quinta biovar B. suis inclui culturas isoladas de vacas e ovelhas abortadas e contendo uma forma R estável de Brucella.

Brucella para fago de Tbilisi: na diluição de trabalho usual, o fago lisa apenas B. abortus. No entanto, em uma dose igual a dez diluições de trabalho, o fago lisa, embora fracamente, cepas de Brucella suis e Brucella neotomae.

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Resistência à Brucella

As bruceloses são relativamente resistentes ao meio ambiente. Sobrevivem em solo e água úmidos por até 2 a 3 meses, e a uma temperatura de 11 a 13 °C - até 4,5 meses; em águas estagnadas - até 3 meses; no leite - até 273 dias; na manteiga - até 142 dias; no queijo - até 1 ano; no queijo feta - até 72 dias; no leite azedo - até 30 dias; no kefir - até 11 dias. No entanto, são muito sensíveis a altas temperaturas - a 70 °C, morrem após 10 minutos e, quando fervidas, em poucos segundos. A pasteurização do leite a 80-90 °C causa sua morte após 5 minutos. As bruceloses também são sensíveis a vários desinfetantes químicos.

Fatores de patogenicidade da Brucella

A Brucella não forma uma exotoxina. Sua patogenicidade se deve à endotoxina e à capacidade de suprimir a fagocitose, prevenindo o "surto oxidativo". Os fatores específicos que suprimem a fagocitose ainda não foram suficientemente estudados. A patogenicidade da Brucella também está associada à hialuronidase e a outras enzimas. É essencial que a Brucella tenha uma propriedade alergênica muito forte, que determina em grande parte a patogênese e o quadro clínico da brucelose.

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Imunidade pós-infecciosa

A imunidade pós-infecciosa é duradoura e forte, mas a recorrência da doença é possível. A imunidade é reticulada (contra todos os tipos de Brucella) e é causada por linfócitos T e macrófagos. Em pessoas e animais imunes, a fagocitose é completa. O papel dos anticorpos na imunidade é estimular a atividade fagocitária. Uma reação alérgica positiva indica não apenas a sensibilização do corpo, mas também a presença de imunidade. Um aumento na imunidade pode ocorrer com a infecção por grandes doses do patógeno ou com sua alta virulência.

Epidemiologia da brucelose

Os principais portadores da brucelose são ovelhas, cabras (Brucella melitensis), bovinos (Brucella abortus), suínos (Brucella suis) e renas (Brucella rangiferis). No entanto, a brucelose também pode se espalhar para muitas outras espécies animais (iaques, camelos, búfalos, lobos, raposas, roedores, lhamas, saigas, bisões, cavalos, lebres, ouriços, galinhas, etc.). A transmissão da Brucella melitensis para o gado bovino é especialmente perigosa, pois, neste caso, ela mantém sua alta patogenicidade para humanos. De todas as espécies, a mais patogênica para humanos em nosso país é a Brucella melitensis. Ela causa doença humana em mais de 95-97% de todos os casos de brucelose. A Brucella abortus, via de regra, causa uma forma latente da doença, e as manifestações clínicas são observadas em apenas 1-3%. A Brucella suis causa a doença com ainda menos frequência (menos de 1%). A patogenicidade da brucelose varia dependendo não apenas da espécie, mas também da biovariedade. Em particular, as biovariedades 3, 6, 7 e 9 de Brucella abortus não são inferiores em virulência à Brucella melitensis. As variantes americanas de Brucella suis também são altamente virulentas, portanto, o papel etiológico de cada espécie de brucelose se manifesta de forma diferente em diferentes países. Por exemplo, no México, o papel principal na epidemiologia da brucelose é desempenhado por Brucella melitensis, nos EUA - Brucella suis, e no Canadá e em alguns países europeus - Brucella abortus. É possível que as biovariedades 3, 6, 7 e 9 de Brucella abortus tenham surgido como resultado da migração de Brucella melitensis para o gado e sua transformação.

Em animais, a brucelose ocorre como uma doença generalizada, cujo quadro pode ser diferente. Em bovinos de grande e pequeno porte, as manifestações mais típicas da doença são abortos infecciosos, especialmente se forem em massa. Em suínos, os abortos são menos comuns; a doença ocorre como sepse crônica com danos às articulações, testículos e outros órgãos. De animais doentes, o patógeno é excretado com leite, urina, fezes, pus e, especialmente, abundantemente - durante o período de aborto espontâneo do feto - membranas amnióticas e secreção do canal de parto, que são os materiais mais infecciosos. A reprodução abundante de brucelose nas membranas fetais está associada à presença de um álcool poliídrico - eritritol, que serve como um importante fator de crescimento para Brunella de todas as espécies, exceto Brucella ovis.

Uma pessoa se infecta a partir de animais (muito raramente de uma pessoa doente), principalmente por contato ou contato domiciliar (80-90% de todas as doenças). A via alimentar de infecção é observada principalmente pelo consumo de leite não pasteurizado de animais doentes ou produtos lácteos preparados a partir dele, bem como água. Todas as pessoas que, devido à sua profissão, lidam constante ou temporariamente com animais ou matérias-primas animais (pastores, pecuaristas, leiteiras, veterinários e outros) podem se infectar por contato ou contato domiciliar. A Brucella entra no corpo humano através da pele ou, muito mais frequentemente, através das mucosas da boca, nariz e olhos (introduzida por mãos sujas).

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Sintomas da brucelose

O período de incubação da brucelose varia de 1 semana a vários meses.

O patógeno entra nos linfonodos através das vias linfáticas; multiplicando-se, forma um "complexo primário de brucelose", cuja localização depende do local da porta de entrada, mas na maioria das vezes é o aparelho linfático da cavidade oral, as glândulas retrofaríngeas, cervicais, submandibulares e o aparelho linfático do intestino. A partir dos linfonodos, o patógeno entra na corrente sanguínea e se espalha por todo o corpo, afetando seletivamente os tecidos do sistema linfohematopoiético. A bacteremia e a generalização do processo levam à alergização grave do corpo. A brucelose ocorre como sepse crônica. Isso se deve à natureza incompleta da fagocitose. Estando e se multiplicando dentro das células, incluindo os fagócitos, as bruceloses são inacessíveis a anticorpos ou quimioterápicos. Além disso, elas podem se transformar em formas L dentro das células e, nessa forma, persistir no corpo por muito tempo e, retornando à forma original, causar uma recidiva da doença.

Os sintomas da brucelose são muito diversos e complexos. Dependem principalmente da alergia e da intoxicação do corpo e dos órgãos e tecidos envolvidos no processo infeccioso. Os sistemas linfático, vascular, hepatoesplênico, nervoso e, principalmente, o musculoesquelético são mais frequentemente afetados. A brucelose é caracterizada por um curso longo (às vezes até 10 meses); em casos graves, pode levar à perda prolongada da capacidade de trabalho e incapacidade temporária, mas, ainda assim, a doença, em geral, termina em recuperação completa.

Diagnóstico laboratorial da brucelose

A brucelose é diagnosticada por meio de teste biológico, método bacteriológico, reações sorológicas, teste alérgico de Burnet e método de hibridização DNA-DNA. O material para o estudo é sangue, medula óssea, secreção conjuntival, urina, leite materno (em lactantes) e, com menos frequência, fezes e fluido periarticular. Como o principal local de residência do patógeno no corpo são células dos sistemas hemopoiético ou linfopoiético, deve-se dar preferência ao isolamento por hemocultura ou mielocultura. Na pesquisa bacteriológica, é necessário fornecer condições para o crescimento de Brucella abortus (necessidade de CO2). A identificação de culturas isoladas de brucelose é realizada com base nos sinais especificados na Tabela 30. Um teste biológico (infecção em cobaias) é utilizado nos casos em que o material está fortemente contaminado com microflora estranha e é difícil obter uma cultura pura do patógeno diretamente dele. Reações sorológicas podem ser usadas para detectar antígenos do patógeno ou para detectar anticorpos contra ele. Para detectar antígenos da brucelose que podem circular no sangue na forma livre ou na forma de complexos antígeno + anticorpo (CIC - complexos imunes circulantes), as seguintes reações são usadas: RPGA (especialmente usando diagnósticos de eritrócitos com anticorpos monoclonais para o antígeno específico do gênero de Brucella); reação de hemaglutinação agregada (AGR); eritrócitos carregam anticorpos para antígenos da brucelose; reações de coaglutinação, precipitação e IFM. Para detectar anticorpos no soro do paciente, são usados os seguintes: reação de aglutinação de Wright, reação de Coombs (para detectar anticorpos incompletos), reação de imunofluorescência indireta, RPGA, IFM, RSK, OFR, bem como reações aceleradas em vidro: Heddleson, Rose Bengal, aglutinação em látex, reação de hemólise indireta (eritrócitos sensibilizados com Brucella LPS são lisados na presença de anticorpos e complemento).

Como prevenir a brucelose?

A vacina contra brucelose é uma profilaxia específica da brucelose. A vacinação é realizada com uma vacina viva preparada a partir da cepa B. abortus (vacina viva contra brucelose - LBB), apenas em focos de brucelose em caprinos e ovinos. A vacina é aplicada cutâneamente, uma única vez. A revacinação é realizada apenas para indivíduos com teste de Burnet e reações sorológicas negativas. Como a LBB tem um forte efeito alergênico, uma vacina química contra brucelose (CBV) preparada a partir de antígenos da parede celular da brucelose foi proposta em seu lugar. Ela tem alta imunogenicidade, mas é menos alergênica. Uma suspensão de brucelose morta (vacina terapêutica morta) ou LBB pode ser usada para tratar a brucelose crônica (estimular a formação de imunidade pós-infecção).