Vírus da hepatite B

A hepatite B é uma doença infecciosa de uma pessoa caracterizada por dano seletivo do fígado por um vírus. Esta forma de hepatite é a mais perigosa em suas conseqüências entre todas as formas conhecidas de hepatite viral. Seu agente causador é o vírus da hepatite B (VHB).

Pela primeira vez, o antígeno do vírus da hepatite B foi detectado por B. Blumberg no soro sanguíneo do aborígene australiano em 1964 e o agente causal foi descoberto em 1970 por D. Dein (e outros) e foi chamado de partículas do dinamarquês, uma vez que não havia certeza absoluta , que este é realmente um vírus, não seus componentes. Posteriormente, todas as dúvidas desapareceram, uma vez que nas partículas de Dano, o DNA genômico e uma DNA DNA-DNA dependente do DNA foram encontrados. O virião contém três antígenos principais, para os quais as seguintes designações foram introduzidas em 1974:

• HBsAg é um antígeno superficial, ou solúvel, ou australiano.
• HBcAg é um antígeno central (co-antígeno).
• HBeAg é um antígeno e, localizado no núcleo do virião e, ao contrário do HBcAg, não está apenas presente no virião, mas também circula no sangue em forma livre ou como um complexo com o anticorpo anti-HBeAg. É segregado no sangue dos hepatócitos com replicação ativa do VHB.

O antígeno de superfície - HBsAg - existe na forma de três variantes morfológicamente diferentes: 1) representa a supercapsid do virião inteiro; 2) em grandes quantidades ocorre na forma de partículas com um diâmetro de 20 nm, tendo uma forma esférica; 3) sob a forma de filamentos com um comprimento de 230 nm. Quimicamente eles são idênticos. HBsAg contém um antígeno comum a e dois pares de determinantes de tipo mutuamente exclusivos: d / y e w / r, portanto, existem quatro subtipos principais de HBsAg (e, respectivamente, HBV): adw, adr, ayw e aur. O antígeno a fornece a formação de uma imunidade cruzada comum a todos os subtipos do vírus.

Na verdade, o virião, a partícula Dain, tem uma forma esférica e um diâmetro de 42 nm. O supercapsídeo do virião consiste de três proteínas: o principal (principal), grande e médio. O genoma está encerrado em uma cápside e é representado por um DNA anular de cadeia dupla com uma massa de 1,6 MD. O DNA consiste em aproximadamente 3200 nucleótidos, mas seu "plus" - não é 20-50% menor do que o sinal de menos. Com a extremidade 5 'do filamento longo, a proteína específica do vírus é covalentemente ligada. As extremidades 5 'de ambas as costas são complementares e formam sequências "pegajosas" de 300 nucleótidos de comprimento, de modo que os filamentos são fechados no anel. O conteúdo de G + C em DNA de virião é 48-49% molar. No núcleo do virião existe além do DNA genômica DNA-DNA DNA-DNA dependente de DNA. O DNA menos negativo de "HBV" contém apenas quatro genes (S, C, P e X), mas eles são organizados de forma muito compacta. Os genes S, C, P, X se sobrepõem fortemente e controlam a síntese dos seguintes produtos. Gene S codifica para a síntese da proteína do revestimento principal e contém todas as informações sobre o antígeno de superfície de HBsAg. Além disso, ele codifica a síntese de proteínas de envelope médio e grande. As proteínas possuem um terminal COOH comum, mas sua tradução começa com três codões iniciadores diferentes. Códigos de gene C para a síntese de proteínas de cápside (HBcAg e HBeAg); embora essas proteínas sejam codificadas por um único gene, as formas de sua tradução são diferentes. Gene P é o maior. Inclui parte dos três outros genes e codifica as enzimas necessárias para a replicação do vírus. Em particular, codifica a transcriptase reversa, o domínio da enzima RNA-ase H, a proteína 5'-terminal da cadeia "menos". O gene X codifica proteínas que regulam a expressão (expressão) de todos os genes virais, em particular uma proteína com uma massa de 17 kD, que é um transactivador de transcrição de genes.

As proteínas que formam um antígeno de superfície existem em forma glicosilada (gp) e não glicosilada. Glicosilados são gp27, gp33, gp36 e gp42 (os números são indicados por m em kD). Supercapsid HBV consiste na principal, ou básica, S-protein (92%); proteína M média (4%) e grande, ou longa, proteína L (1%).

• A proteína principal, p24 / gp27, ou a proteína principal (proteína S), é o principal componente do envelope HBV. Na ausência de outras proteínas de casca, ele polimeriza e forma partículas esféricas com um diâmetro de 20 nm, que consistem em 100 moléculas de polipéptido.
• Uma proteína grande, p39 / gp42, ou uma proteína longa (proteína L), está presente nas três formas de HBsAg. Ele desempenha um papel importante na morfogênese dos viriões e na sua saída da célula. A proteína L contém uma sequência de proteína M que é complementada no N-terminal por sequências de 108 (ayw) ou 119 (adw, adr, ayr) de resíduos de aminoácidos codificados pela região npe-Sl do gene S.
• A proteína média - gp33 / gp36, ou a proteína M, também está presente nas três formas morfológicas do HBsAg. A proteína M contém, no N-terminal, uma região de 55 resíduos de aminoácidos codificados pela região pré-52 do gene S. Supõe-se que este site desempenha um papel importante no reconhecimento do vírus da hepatite B por células do fígado de um intervalo de hospedeiro limitado (humano, macaco chimpanzé). As sequências de proteína codificadas pelas regiões Npe-S do gene S possuem alta imunogenicidade e seus determinantes estão localizados na superfície do virião. Portanto, os anticorpos contra esses antígenos desempenham um papel importante na formação da imunidade contra a hepatite B.

A síntese de proteínas virais é bem controlada no nível de transcrição e tradução. Na transcrição do genoma viral, dois tipos de mRNA são sintetizados:

• um menor - 2100 nucleótidos - codifica as proteínas principais e médias da membrana;
• grande - 3.500 nucleótidos, isto é, mais do que o próprio DNA genômico; contém repetições terminais de 100 nucleótidos de comprimento.

Este tipo de mRNA codifica a proteína da cápside e os produtos do gene P. É também um modelo para a replicação do DNA viral. Como parte do genoma, existem potenciadores (potenciadores da transcrição) - elementos regulatórios que ativam a expressão de todos os genes virais e atuam principalmente nas células do fígado. Em particular, o gene S é expresso em um nível muito alto apenas nas células do fígado e sob a influência de hormônios esteróides. Esta circunstância explica por que a hepatite B crônica e câncer de fígado (hepatoma) são observados nos homens com mais freqüência do que nas mulheres com menor nível de hormônios esteróides.

Outros elementos reguladores do vírus da hepatite B modulam (controle) os níveis de síntese de proteínas individuais. Por exemplo, uma proteína grande é sintetizada apenas em pequenas quantidades. A maior parte da superfície dos viriões infecciosos. E a proteína principal e, em menor grau, a proteína do meio são sintetizadas em grandes quantidades e deixa as células nas partículas de antígeno de superfície, que no soro contêm muitas vezes mais do que os viriões maduros. O número de partículas de antigénio de superfície pode ser de 1011 a 1013 por 1 ml de sangue (várias centenas de ug).

O vírus da hepatite B está isolado em uma nova família de vírus - Hepadnaviridae, gênero Orthohepadnavirus. Foram encontrados hepadnavírus semelhantes em vários animais (proteínas terrestres, marmotas, esquilos, patos de Pequim).

A reprodução dos hepadnavírus ocorre de forma incomum. Em particular, a replicação de DNA genômico ocorre através do link intermediário - RNA, ou seja, com o mecanismo de transcrição reversa.

O ciclo de vida do vírus da hepatite B.

• Adsorção na célula.
• Penetração na célula pelo mecanismo da endocitose mediada pelo receptor (fossa bordada -> vesícula confinada -> lisosoma -> nucleocápsido rendimento e penetração do genoma viral no núcleo dos hepatócitos).
• Reprodução intracelular.

Durante a penetração na célula, a cadeia de DNA curta ("plus") se alonga (completa). No núcleo, a ARN polimerase celular dependente do DNA sintetiza um ARN de 3.500 nucleótidos (pregenes) e mRNAs menores para a síntese de proteínas virais. Em seguida, o pregene e a ADN polimerase viral são empacotados em uma cápside recém-sintetizada, que é transferida para o citoplasma. Aqui, ocorre a transcrição reversa do prégenoma. Ele sintetiza um novo DNA "menos" -defino. Após a síntese do ADN negativo ser completada, o ARN prégenômico é destruído. A ADN polimerase de virion na cadeia "menos" sintetiza uma cadeia "plus". O DNA viral, agora de cadeia dupla, pode existir na célula por um longo período de tempo e retornar ao núcleo para o próximo ciclo de replicação. Se a nova partícula de vírus não for submetida a replicação adicional, então a nucleocápside que é formada, passando pela membrana celular, é coberta com super-cápside, brotos da célula, e a cadeia curta de "plus" de DNA imediatamente pára por aí. É por isso que o comprimento desse segmento varia. Na forma aguda típica da hepatite B, sorologicamente, os seguintes marcadores sorológicos aparecem sucessivamente no sangue: HBsAg, HBeAg e anticorpos (IgM, IgG): anti-HBcAg. Anti-HBeAg e anti-HBsAg.

O vírus da hepatite B não contém um oncogene, mas é estabelecido que ao introduzir no cromossomo celular (em diferentes locais), o DNA viral pode induzir várias alterações genéticas - deleções, translocações, amplificações, que podem causar câncer de fígado - um das mais graves conseqüências da hepatite B viral

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Resistência do vírus da hepatite B

O vírus da hepatite B é altamente resistente. À temperatura ambiente, permanece viável por 3 meses, no estado congelado - por vários anos. O vírus é completamente inativado por autoclave (120 ° C), fervendo durante 30 minutos, calor seco a 180 ° C durante 60 minutos, a 60 ° C durante 10 horas. É estável em um meio ácido, mas é destruído em alcalino. O vírus morre quando tratado com H202, cloramina, formalina, fenol e com irradiação UV.

Patogênese e sintomas da hepatite B

O vírus é injetado hematogênicamente diretamente no fígado. Na patogênese da hepatite, as respostas auto-imunes humorais e celulares desempenham um papel importante. Supõe-se que a derrota dos hepatócitos não está associada tanto à ação direta do próprio vírus como às reações imunológicas do hospedeiro que se apresentam em conexão com a modificação da membrana celular por proteínas virais que induzem a formação de autoanticorpos em células hepáticas. Portanto, o desenvolvimento de hepatite crônica e cirrose do fígado pode ser considerado como uma doença auto-imune.

As reações autoimunes celulares às proteínas virais contidas na membrana dos hepatócitos são mediadas por linfócitos citotóxicos T e outras células assassinas hepáticas. Portanto, a distrofia aguda do fígado pode ser considerada como uma reação de rejeição de um heterogênio peculiar.

O período de incubação é de 45 a 180 dias, uma média de 60 a 90 dias. O curso clínico da hepatite B caracteriza-se por uma grande diversidade; a doença pode ocorrer: de forma latente, detectada apenas por métodos de laboratório, de forma icterica típica e de forma maligna que acaba por ser letal. A duração do estágio pré-icterizado varia de um dia a várias semanas. O período icterico, como regra geral, é longo e caracteriza-se por sintomas bem marcados (icterícia, hiperbilirrubinemia, escurecimento da urina, esclera icterica). Forma prolongada é observado em 15-20% de pacientes e 90% deles desenvolvem hepatite crónica B. Os pacientes com a forma crónica processos autoimunes frequentemente observados são acompanhadas por um elevado teor de anticorpos protivopechenochnyh que são detectados por ensaio imunoenzimático (IPM) ligado a enzima. Em crianças, a hepatite B é leve e muitas vezes sem icterícia, em crianças pequenas - principalmente assintomáticas.

A imunidade pós-infecciosa (humoral e celular) é longa, ao longo da vida, devido a anticorpos neutralizantes de vírus (anti-HBsAg) na ausência de antígeno de superfície no sangue. Muitas vezes observado imunização latente devido ao contato repetido com VHB, que é a causa da imunidade generalizada ao vírus entre a população. Normalmente, pacientes com forma aguda de hepatite B se recuperam completamente à medida que os anticorpos se acumulam. No entanto, em alguns casos, apesar do alto nível de antígeno viral no sangue (uma circunstância explicando por que a infecção parenteral ocorre com mais frequência), não são produzidos anticorpos contra ele. O vírus permanece no fígado, e uma pessoa por um longo tempo, às vezes para a vida, torna-se um transportador crônico. Esta circunstância está obviamente ligada a uma resposta imune fraca. Um dos resultados mais freqüentes da hepatite B crônica é cirrose e câncer de fígado, que se desenvolve após um período latente de até 30 a 50 anos.

Epidemiologia da hepatite B

A fonte de infecção com o vírus da hepatite B é apenas uma pessoa. Contrariamente às representações anteriores que a infecção com o vírus da hepatite B ocorre exclusivamente por via parentérica, é agora provado que é encontrado em várias secreções e excreções :. Saliva, secreções da nasofaringe, fezes, fluido lacrimal, sémen, sangue menstrual, etc. Assim, A infecção ocorre não só por via parenteral, mas também sexual e vertical (da mãe ao feto), ou seja, infecta praticamente o vírus da hepatite B de maneiras possivelmente diferentes.

A hepatite B no mundo matou tantas pessoas como durante todos os anos da Segunda Guerra Mundial. O número de transportadores de VHB, de acordo com a OMS, é de 0,1 a 20% da população de diferentes países ou regiões.

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Diagnóstico da hepatite B

Atualmente, o principal método para o diagnóstico de hepatite B é o uso de uma reação de hemaglutinação passiva reversa (ROSGA) para detectar um vírus ou seu antígeno de superfície, HBsAg. Como já observado, o sangue do antígeno de superfície contém muitas vezes mais do que o próprio vírus (100-1000 vezes). Para a reação de ROPGA, os eritrócitos são sensibilizados com anticorpos contra o vírus da hepatite B. Se houver um antígeno no sangue, ocorre uma reação de hemaglutinação. ROPGA é simples, conveniente, muito específico. Para detectar anticorpos contra o antígeno do vírus HBsAg, são utilizados vários métodos imunológicos (DSC, RPGA, IFM, RIM, etc.). Além disso, as variantes de PCR são usadas para detectar o VHB e seus antígenos.

Vários métodos imunológicos podem ser usados para detectar anticorpos contra o antígeno viral (HBsAg) no soro do paciente (DSC, RPGA, reação de precipitação, IFM, RIM, etc.).

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Prevenção específica da hepatite B

Tendo em conta a elevada incidência de hepatite B, e também que existem muitos transportadores de VHB no mundo, as vacinas da OMS contra a hepatite B são obrigatórias e devem ser realizadas no primeiro ano de vida. São sugeridos dois tipos de vacinas para a vacinação. Para preparar um deles, o plasma de portadores de vírus é usado como matéria-prima, uma vez que o antígeno do vírus está contido em quantidades suficientes para preparar a vacina. A principal condição para a preparação deste tipo de vacina é a sua total segurança, isto é, a inativação completa do vírus, que é fornecida pela tecnologia de preparação de vacinas. Para fabricar uma vacina de um tipo diferente, são utilizados métodos de engenharia genética, em particular, um clone recombinante de levedura que produz o antígeno de superfície do vírus da hepatite B é usado para preparar o material antigênico.

Ambas as vacinas são altamente eficazes (proteja 95% dos vacinados). A duração da imunidade pós-vacinal não é inferior a 5-6 anos. Foram criadas vacinas para adultos e bebês e crianças pequenas - o componente mais importante na luta global contra a hepatite B. O curso completo de vacinação consiste em três injeções:

Eu dose - imediatamente após o nascimento; II dose - após 1-2 meses; III dose - até o final do primeiro ano de vida.

Essas vacinas estão incluídas no programa expandido de imunização da OMS e são combinadas com o calendário de sua implementação (recomendação da OMS, no 1º ano de vacinas contra a tuberculose, poliomielite, hepatite B, sarampo, tétano, difteria, tosse).

A gammaglobulina, que contém anticorpos contra o VHB, é utilizada para imunoprofilaxia passiva de emergência para pessoas que tiveram contato com um paciente com hepatite B.

Para tratar a hepatite B (formas agudas e crônicas), use interferão e amixina (para indução de síntese endógena). No tratamento da hepatite B crónica, um novo fármaco de lamivudina (nucleósido sintético) é eficaz.